MA-0817H005L/S 模基生物小鼠气管类器官培养基套装

模基生物小鼠气管类器官培养基套装

产品描述

模基生物小鼠气管类器官培养基套装是一种化学定义的细胞培养基，用于建立和维持来自小鼠气管干细胞的小鼠气管类器官。气管的自我更新上皮细胞是由基底细胞的增殖驱动的。小鼠气管类器官包含基底细胞、纤毛细胞、分泌细胞和少量神经内分泌细胞，因此类器官显示了气道的所有特征。因此，上皮细胞在结构、细胞类型组成和自我更新动力学方面具有很大的应用前景，可用于气道稳态与疾病的研究。

产品信息

其他自备材料和试剂

MG&ABW基质胶

上皮类器官基础培养基

类器官消化液

润洗液

类器官冷冻保存培养基(无血清)  

胎牛血清（FBS）

DPBS (1X)，液体，不含钙和镁  

小鼠气管类器官完全培养基的制备

使用无菌操作技术配制小鼠气管类器官完全培养基。以下是准备 10mL 完全培养基的示例，如所需量不同，可相应调整

用量。

1. 冰上解冻 Mouse Airway Organoid Supplement B (50x)和 Mouse Airway Organoid Supplement C (250x)。

注意： 解冻后，建议将 Mouse Airway Organoid Supplement B (50x)和 Mouse Airway Organoid Supplement C (250x)

分别分装后保存取用，避免反复冻融。

2. 将 200uL Mouse Airway Organoid Supplement B (50x)，40uL Mouse Airway Organoid Supplement C (250x) 加至

9.76mL Mouse Airway Organoid Basal Medium 中，充分混合，配制成 10mL 小鼠气管类器官完全培养基。

注意：配制后的小鼠气管类器官完全培养基可在 2-8°C 储存，建议在两周内使用。Mouse Airway Organoid Supplement

B(50x)内含有细菌及真菌抗生素(50x)。

小鼠气管类器官培养

小鼠气管类器官的原代建立

1. 在含有抗生素的预冷DPBS中收集小鼠原代气管组织。

2. 用DPBS冲洗两次组织。

3.在细胞培养皿中使用外科剪刀或手术刀将组织切成1-3毫米的小碎片。

4. 用10mL类器官消化液在15mL离心管中37°C消化组织碎片，孵育时间从30分钟到1小时不等。仔细监测消化过程，每5-10分钟摇一次离心管，或上下颠倒混匀。当大多数组织碎片能够通过1mL移液管尖端时，消化过程就完成了。

5. 将FBS加入组织消化液中，最终浓度为2%，用100 μm细胞过滤筛过滤。

6. 收集过滤后的细胞，在4℃下250g离心3分钟。如发现明显的红色颗粒，抽吸上清，用2mL红细胞裂解液重悬红细胞在室温下静置1分钟，然后在4℃下250g离心3分钟。

7. 弃去上清液，将颗粒重悬于上皮类器官基础培养基，在4℃下250g离心3分钟，再次重复此步骤。

8. 弃去上清液，将细胞悬液重悬于基质胶中。基质胶应该保存在冰上以防止固化，此步骤应尽快完成。基质的用量取决于基质的大小，推荐重悬密度为每 10uL基质胶悬液包含大约10,000个细胞。

注意：基质胶稀释比例应在 70%以上以保证培养过程中基质胶的结构稳定性。

9.将基质胶和组织细胞的混合悬液点入 24 孔板底部正中央，每孔 30uL 左右，避免悬液接触孔板侧壁。

注意：为防止基质胶室温凝固，此步骤应尽快完成。

8. 将接种完成后的培养板至于 37℃二氧化碳恒温培养箱中，孵育15-25分钟待基质胶凝固。

9. 配制小鼠气管类器官完全培养基。

10. 待基质胶完全凝固后，加入已配制好的小鼠气管类器官完全培养基，24 孔板每孔 500uL。

11. 将 24 孔板置于 37℃二氧化碳培养箱中培养，直到类器官需要进一步的实验。

类器官的传代培养

1. 用经过润洗液润洗的枪头吹打刮取类器官，并将类器官和培养基的悬液转移至经 过润洗液润洗的 1.5mL EP 管中。

2. 用经过润洗液润洗的枪头用力重悬类器官悬浮液，使得类器官与基质胶分离。

3.250g 离心力室温离心 3min。

4.弃上清，使用类器官消化液或用机械破坏。对于使用类器官消化液的细胞解离，在类器官消化液中重悬类器官悬浮液，移液器反复上下吹打并置于37°C孵育，直至类器官解离。使用带滤芯移液头每2分钟反复上下吹吸8次，以帮助破坏类器官。密切监视消化过程使在类器官解离液中的孵育时间最短。如发生机械故障，在1.5 mL上皮类器官基础培养基中重悬类器官悬液。小心地用移液管吸取类器官悬浮液，反复上下30次，这将有助于消化。

警告:不要在类器官解离液中解离超过5分钟，因为这可能会导致较差的类器官的生长甚至破坏。根据经验，如果是小块细胞的混合物，可以观察到由10-50个细胞组成的细胞团，消化就完成了。

5. 消化完成后，用1ml上皮类器官基础培养基进行一次冲洗，然后室温下250g离心3分钟。

6. 弃上清，用适量的基质胶重悬类器官沉淀，重悬后置于冰上，重悬时间不超过 30s 以避免基质胶过早凝固。

注意：基质胶稀释比例应在 70%以上以保证培养过程中基质胶的结构稳定性。

7. 将基质胶和类器官的混合悬液点入 24 孔板底部正中央，避免悬液接触孔板侧壁，每孔 30uL 左右。

注意：为防止基质胶室温凝固，此步骤应尽快完成。

8. 将接种完成后的培养板至于 37℃二氧化碳恒温培养箱中，孵育 15min 左右待基质胶凝固。

9. 配制小鼠气管类器官完全培养基。

10. 待基质胶完全凝固后，加入已配制好的小鼠气管类器官完全培养基，24 孔板每孔 500uL。

11. 将 24 孔板置于 37℃二氧化碳培养箱中培养，直到类器官需要进一步的实验。