【每周质检】小鼠气道上皮类器官培养

1.培养材料

试剂：MatrigengeL Matrix、小鼠气道上皮类器官培养试剂盒、组织解离试剂盒、润洗液、基础培养基、DPBS、双抗。

耗材：48孔细胞培养板、离心管（规格为1.5mL、15mL和50mL）、细胞培养皿（6cm）、移液器（规格为10μL、200μL、1000μL）、无菌吸头（规格为 10μL、200μL 和1000μL）、无菌镊子、无菌组织剪 、100μm细胞过滤器。

2.实验前准备

（1）MatrigengeL Matrix 4℃化冻；

（2）小鼠气道上皮类器官完全培养基的制备：将200μL Mouse Airway Organoid Supplement B (50x)，40μL Mouse Airway Organoid Supplement C (250x) 加至 9.76mL Mouse Airway Organoid Basal Medium中，充分混合，配制成10mL小鼠气道上皮类器官完全培养基。室温平衡，可在2℃-8°C储存，建议在两周内使用；

（3）准备足量添加1%双抗的DPBS；

（4）配制10mL组织解离液，现配现用，37℃摇床混匀预热，未用完消化液可放置-20℃保存1周（10mL基础液加入500μL消化酶）。

3.类器官培养

（1）组织样本收集：小鼠断颈处死，表面喷洒酒精杀菌，在无菌条件下将气管取出，放入4℃预冷的DPBS溶液中。

（2）组织清洗：用冰冷的DPBS清洗2~3次，将组织转移到新的1.5mL EP管中，用无菌组织剪将组织剪成约0.5mm³的碎片。

（3）消化液消化：将剪碎的组织用适量的原代组织液消化液重悬于37℃，100rpm条件下的恒温振荡培养箱中，消化30-60分钟，每隔10分钟观察组织消化情况，待组织块明显分散，悬液较浑浊时，取适量组织消化悬液镜检，待悬液中有较多细胞团即可终止消化。若组织碎块较大或消化不完全可适当延长消化时间，消化期间可以使用不同规格1mL的移液器吹打组织消化悬液，帮助充分消化。

（4） 终止消化：当镜检悬液出现大量气管上皮细胞时，即表明消化完成，在消化完成的组织悬液中加入胎牛血清（Fetal Bovine Serum, FBS）至终浓度达 1%~5%以减缓消化作用，同时轻轻吹打5~10次。

（11）持续培养：将细胞培养板放入培养箱中进行培养，每1天于倒置显微镜下观察类器官的生长状态，每2~3天更换完全培养基，于倒置显微镜下拍照，记录类器官的形态和分布。

1.为减少实验误差，对胆管类器官传代后培养效果进行测评。

2.Brand C该批次基质胶培养后两次均有明显的细胞贴壁现象，而模基基质胶所培养的气道上皮类器官细胞饱满、边缘清晰、几乎没有贴壁现象，该现象表明模基基质胶在支撑性能上，优于Brand C基质胶。

模基生物基质胶经过严格的质检验证，具备安全性高、浓度多样性、批次稳定性好、低内毒素、无污染。在购买模基产品时，根据用户个性化的需求对用户进行最佳产品、货号的推荐，以便用户获得性价比最高、效果最优的产品。

进行类器官培养时，推荐使用低生长因子基质胶与类器官专用基质胶，低生长因子基质胶是进行了低因子处理的。在天然基底膜基质中含有微量生长因子，其中有EGF、IGF、VEGF这类促进细胞生长分化的因子，也有TGF-β这类可能促进细胞凋亡的因子。低生长因子型基质胶减少干扰因子，能更好的进行人工诱导分化，而类器官专用基质胶则是经过多项附加测试验证，确定效果脱颖而出的低生长因子基质胶，培养效果稳定而又出众。