别让培养基配制成为类器官研究的阻碍
前言
作为生命科学研究最常用且最重要的方法，细胞体外培养技术直接影响了研究结果的准确性。传统二维细胞培养模型，药物无差别作用于每个细胞，细胞间作用力弱，类型单一，细胞贴壁生长，无法模拟体内的生长环境和空间结构。类器官培养不仅能高度模拟体内细胞生长环境，保持细胞生长结构，拥有器官的部分功能特性，而且能更好地代表组织器官的生理功能和生物学特性。但现阶段许多类器官原代建立尚存在成功率低，培养条件不稳定的情况，而使用合适、优秀的类器官培养基不仅是类器官培养成功的一大关键，还能省时省力节约科研成本。
今天我们来聊聊类器官的培养基。
类器官培养基的主要成分
类器官培养基主要由基础培养基、培养基补充剂、氨基酸、细胞因子、小分子抑制剂、激素、缓冲液等构成[1]。
常用的基础培养基有Advanced DMEM/F12,Advanced DMEM等。这个根据不同类器官需求不难选择。但细胞因子、小分子抑制剂、激素这些量小作用大的就让人头疼了，常见的有30余种不同成分。如广泛使用的Wnt-3a，常用于乳腺类器官、小肠类器官、肝脏类器官的R-spondin-1，表皮生长因子[2]，Noggin，激活素；以及促进增殖、防止分化、维持干性的A83-01等等。
自配置类器官培养基进行科学研究
一.
材料与知识准备
1.研究文献
一般需要1周左右时间的文献查阅来确定培养基成分并估算用量。
2.购买培养基配置材料
对于细胞因子、抑制剂、激素等小批量购买时不仅需要极高的单价还要极长的货期。正常到货需1到2个月，等待期间可进行该类器官培养操作的技术学习。
二.
类器官培养基配置方法
1.实验仪器及材料
（1）仪器：生物安全柜、电子分析天平、pH计、超纯水器等；
（2）材料：烧杯、容量瓶、分装瓶等；用于培养基配制的器皿需做到：不挂水滴、无有机物、无致热原[3]。
2.培养基配置
（1）配制用水：选择最新过滤的反渗透水，再用超纯水机过滤为去热原培养基用水（TOC<10，即总有机碳<10mg/L）；
（2）使用电子天平准确称量试剂，充分溶解，并调节pH值至7.4，定容后过滤分装；
（3）按不同类器官对因子的需求向基础培养基中加入所需细胞因子和抑制剂如Wnt-3a[4]、R-spondin-1、Noggin等，充分混匀；
三.
自配培养基完成后的常见问题
培养基配制完成后，材料齐备便可进行类器官的培养，而新手培养类器官若没有正确的技术指导以及方便快速的步骤流程，仅凭借看文献得来的技术培养常常事倍功半难以成功。此时若类器官长势差、出芽率低、活性差，难以判断是技术原因还是培养基原因，更有甚者形态怪异，与所知该类器官应有形态不一致，在类器官鉴定后发现所培养的类器官并非目标类器官，只能通过反复分析，重新配制，再次培养，既耗时又费力。
研究实验常常无法确定培养基中的因子用量，配制培养基时条件严苛，步骤也繁多，配制时需小心谨慎，且费时费力。因此从文献研究开始，到培养的类器官可以进行实验需要6个月甚至更久。
正所谓术业有专攻，对因子方面研究不多的老师即使没有错漏的配制出来后，也同样容易出现培养的类器官出芽率低，活性差，或是类器官长势良好却在研究中掉链子的情况，甚至研究开始后进展不佳难以继续。
那么有没有什么方法能打破由培养基配制问题造成的时间浪费、成本支出过高、培养效果不佳等研究阻碍呢？
自配置类器官培养基进行科学研究
一.
产品选择和方案推荐
二.
技术支持
模基生物发货快，货期短。一般1~2周便可到手进行类器官培养，在货期等待期间模基生物会将该方面培养方法，培养操作流程等一并送出，并在类器官交流群中为大家实时答疑。
三.
类器官培养
模基生物类器官培养经验丰富，总结的培养实验流程操作简单而又效果极佳。根据模基实验方案可大幅提升初次培养成功率，在材料上和技术上都为用户尽可能提高了培养的成功率，而若不幸培养失败，模基也能协助分析原因。为用户节省时间，减少材料消耗，从产品细节询问至类器官能进行研究实验仅需1～1.5个月。
四.
总结
综上，若研究本身便以因子，小分子抑制剂为重点，那么自己配制类器官培养基是必要的。而对于不以优化培养基成分为目的的研究实验，比起自配类器官培养基来说选择模基培养基则是类器官方面研究的一大助力。
价格方面，自配培养基最大的支出在于细胞因子，细胞因子通常购买量少则单价大幅提升。以常用因子rhR-spondin-1为例，1mg标准的rhR-spondin-1需2万元左右，而5×20μg标准的rhR-spondin-1便需要1万多元。不考虑多买以备不足的因子仅以消耗计算，自配500ml类器官培养基需近两万元，模基类器官培养基500ml则在一万元左右。
时间方面，自配培养基的老师在材料还未到手时，选择模基培养基的老师便已完成类器官培养开始研究了。
技术方面，模基生物有扎实的类器官理论基础，丰富的类器官培养经验，以及坚定的科研信念。在这样的技术支持下培养的类器官虽不能令各位老师的研究实验一片坦途，毫无困难；但能稳定发挥，排除干扰让各位老师不为类器官培养所掣肘，在所擅长的研究领域一展身手，大显神威。
模基类器官培养基产品列表
五.
参考文献
[1]刘琦,姚茜,韦正波,谢莹.类器官培养基主要成分的作用机制及潜在功能【J】.中国组织工程研究,2021(31):5072-5078.
[2]米杜秋,张路阳,刘强,张东勇.表皮生长因子对胶质瘤干细胞增殖与侵袭的影响【J】.解剖科学进展,2019(01):70-73.
[3]张宏 , 刘玉琴 . 培养基的正确制备及使用 [J]. 基础医学与临床 ,2009, 29(4):446-448.
[4]XIAO XH, HUANG QY, QIAN XL, et al. Cdc42 Promotes ADSC-Derived IPC Induction, Proliferation,And Insulin Secretion Via Wnt/β-Catenin Signaling. Diabetes Metab Syndr Obes. 2019;12:2325-2339.
六.
关于模基
厦门模基生物科技有限公司位于厦门市国家高新技术创业中心，拥有分子克隆和细胞编辑中心、实验动物中心、蛋白表达和纯化中心、类器官质检中心。致力于3D细胞培养核心原材料研发与产业化升级，包括3D细胞培养试剂－基质胶、培养基、细胞因子、3D细胞培养耗材、3D细胞培养智能显微镜等。实现了3D细胞培养核心原材料完全自研自产，为客户提供整套完美闭环的3D细胞培养一站式解决方案！
