ABW基质胶常见问题

1.ABW® Matrigengel 高浓度基底膜基质用于哪些实验？

      ABW® Matrigengel 高浓度基底膜基质可适用于体内应用研究，如高浓度蛋白可促进肿瘤生长。高蛋白浓度同时可使ABW® Matrigengel 基底膜基质注射入小鼠皮下后保持完整，有利于注射的肿瘤细胞和/或血管生成因子保持原位，便于用于原位分析和/或以后的切除。

2.如何将ABW® Matrigengel 基底膜基质用于3D培养？怎样制作3D胶？需要将细胞嵌入到ABW® Matrigengel 基底膜基质中吗？

       ABW® Matrigengel 高浓度基底膜基质可适用于体内应用研究，如制备厚层包被用于3D细胞培养。细胞可以嵌在ABW® Matrigengel 基底膜基质中或者接种在ABW® Matrigengel 基底膜基质表面（覆盖法）。

3.使用ABW® Matrigengel 基底膜基质时，需要将移液器吸头和离心管预冷吗？

       是的。因为ABW® Matrigengel 基底膜基质在高于10℃的条件下即会开始成胶，我们推荐操作基底膜基质时使用预冷的移液管、吸头和离心管。

4.ABW® Matrigengel 基底膜基质会快速聚合吗？

       ABW® Matrigengel 基底膜基质在 22℃至 35℃时会快速聚合成胶。

5.什么情况下，需要使用无酚红ABW® Matrigengel 基底膜基质？

       对于涉及颜色检测的实验，推荐使用无酚红ABW® Matrigengel 基底膜基质，如使用荧光染料或 Drabkins 法计数内皮细胞成管实验。对于子宫内膜细胞培养，也需使用无酚红ABW® Matrigengel 基底膜基质。

       此外，酚红和非甾体雌激素结构类似，有类雌激素效应。在实验动物体内可能具有干扰内分泌和荷尔蒙代谢的能力。

6.如何从ABW® Matrigengel 基底膜基质中收获细胞？

       推荐使用中性蛋白酶或细胞回收解决方案来收获培养在ABW® Matrigengel 基底膜基质中的细胞。

       中性蛋白酶相比胰酶、胶原酶或其他蛋白水解酶能够更温和有效地获得单细胞悬液，不会损伤细胞或细胞表面蛋白。对于需要继续接种培养或进行检测的细胞，使用中性蛋白酶不会产生损伤。此外中性蛋白酶也可以用于组织分离。

        对于代谢研究和RNA抽提，建议在4℃使用细胞回收解决方案进行非酶反应的细胞收获。因为ABW® Matrigengel 基底膜基质中含有痕量的RNA，进行RNA分析时，应设一个ABW® Matrigengel 基底膜基质（不接种细胞）的对照组。

其它从ABW® Matrigengel 基底膜基质中收获细胞的方法：

        降低温度至4℃-6℃使ABW® Matrigengel 基底膜基质解聚，需要一定的时间并且仅适合一部分应用。

        离心以破坏ABW® Matrigengel 基底膜基质结构。

7. ABW® Matrigengel 基底膜基质包被过的培养皿可以储存多长时间呢？

       包被过的培养皿最好当天使用，具体情况取决于实验目的。需要保存的情况下，可在37°C培养箱中最多存放7天。保存时ABW® Matrigengel 基底膜基质表面需要使用无血清培养基均匀覆盖，保持湿润。

8. 哪些情况下应该选用薄胶？什么时候用厚胶呢？ 3D培养有哪些应用？

      薄胶主要用于辅助细胞贴壁，有利于细胞增殖。如原代细胞培养，需要一层薄薄的蛋白层辅助，就可以选用薄胶；厚胶主要用于3D细胞培养，如大鼠主动脉组织分化为毛细血管样结构（Ring Assay），以及进行细胞侵袭实验等；3D细胞培养实验，主要是用于研究细胞与细胞间的相互作用以及复杂结构，如生物组织等。

9. 进行内皮管形成实验，应该选用多大浓度的 ABW® Matrigengel 基底膜基质呢？

       进行该实验，ABW® Matrigengel 基底膜基质最低浓度应不低于10mg/mL。

10. 做细胞侵袭实验，需要使用多少ABW® Matrigengel 基底膜基质进行包被？

       包被24孔通透性支持物，推荐每孔使用0.1 mL (浓度100-200μg/cm²) ，ABW® Matrigengel 基底膜基质货号为082704。

11. ABW® Matrigengel 基底膜基质的最低成胶浓度是多少？

       不同的实验目的需要不同的 ABW® Matrigengel 基底膜基质浓度，用户应该根据具体的实验需求确定。ABW® Matrigengel 基底膜基质最低成胶浓度为 3 mg/mL。稀释时不要简单进行体积倍比稀释，不同批次间的 ABW® Matrigengel 基底膜基质浓度有差异，应该根据最终工作浓度 (mg/mL)算出需要加入的稀释液体（如PBS或无血清培养基）的量。用于体内研究的 ABW® Matrigengel 基底膜基质，为了避免成胶不完全，最终工作浓度不应低于 4 mg/mL。

12. ABW® Matrigengel 基底膜基质胶块在体内可以维持多长时间？

       基质胶胶块可以在体内维持至少一周的时间。

13. 怎样稀释ABW® Matrigengel 基底膜基质?

      使用冰上预冷的无血清培养基或者PH 7.4的PBS。

14. 应该如何对ABW® Matrigengel 基底膜基质移液操作?

       推荐使用预冷的移液器或者注射器操作，移液管、枪头同样需要预冷。吸液时不要触及瓶子底部；分液时切忌过快、用力过猛。如果使用移液管（Pipets），需要分液5mL时，应该吸取6mL，分液到移液管内仍有1mL时即停止；如果使用自动移液器（Pipetman），按压到第二档位吸液，然后按压到第一档位进行分液。

15. 为什么我的ABW® Matrigengel 基底膜基质很粘稠？

       基质胶的蛋白浓度越高，胶体越粘稠。如果浓度高于13.0 mg/mL，基质胶会显得非常厚重。ABW® Matrigengel 基底膜基质基质胶产品在未稀释前都会比较粘稠。粘稠的高浓度ABW® Matrigengel 基底膜基质(ABW® Matrigengel 基底膜基质 HC)不稀释也可以直接使用，如用于培养肿瘤细胞和/或血管生成因子，注射于小鼠体内后，细胞可以保持原位，便于原位分析和/或以后的切除；或者稀释后，按照标准浓度的ABW® Matrigengel 基底膜基质产品使用方法使用，具体稀释浓度根据实验需求确定。

       除因为产品本身浓度高而粘稠外，基质胶的状态还与运输过程中温度的变化和储藏条件有关。整个运输过程中必须使用干冰冷藏。如果储藏ABW® Matrigengel 基底膜基质的冰箱带有自动除霜功能，冰箱除霜过程中升温，可能使基质胶成胶。所以，切忌将ABW® Matrigengel 基底膜基质储藏于此类冰箱中。为保证ABW® Matrigengel 基底膜基质的使用效果，冻融次数应该尽可能减少。拿到新的ABW® Matrigengel 基底膜基质后，请按照单次用量进行分装。每次融化操作，ABW® Matrigengel 基底膜基质都应该放置于冰上。如果ABW® Matrigengel 基底膜基质在成胶状态被冻住，再次融化时将不能成恢复液体。

16. ABW® Matrigengel 基底膜基质可以诱导ES/iPS细胞分化吗？

      可以的，已经有相关文章表明ABW® Matrigengel 基底膜基质可以用于ES/iPS细胞的分化研究。

17. 为什么ABW® Matrigengel 基底膜基质在37°C成胶，而在4°C时却呈液体状态？

       ABW® Matrigengel 基底膜基质是一种从小鼠骨肉瘤中提取的重组基底膜， 新鲜提取的原料中主要包括以下成分：层粘连蛋白，IV型胶原, 巢蛋白，基底膜聚糖、表皮生长因子、类胰岛素生长因子及其他生长因子。这些蛋白构成了 ABW® Matrigengel 基底膜基质的基本结构。在22℃-37℃温度条件下，大分子间的共价键可以结合，促使 ABW® Matrigengel 基底膜基质形成凝胶。而在低温条件（如4℃）下，由于没有足够的能量促使共价键结合，所以 ABW® Matrigengel 基底膜基质呈现液体状态。

18. ABW® Matrigengel 基底膜基质可以反复冻融吗？

      建议用户第一次融化后按照单次用量进行分装，保存。

19. 为什么细胞没有贴壁？ABW® Matrigengel 基底膜基质也脱落了？

      首先需要检查细胞的接种浓度是否过高，ABW® Matrigengel 基底膜基质的用量应等同于细胞培养体系中培养基的用量。如果ABW® Matrigengel 基底膜基质被稀释到过低的浓度，形成的胶体容易从组织培养器皿表面分离。

20. 未稀释的ABW® Matrigengel 基底膜基质中出现的沉淀应该怎么样处理？

      4℃下低速离心，去除沉淀物 。

21. 未使用完的ABW® Matrigengel 基底膜基质应该怎样保存的？

       与细胞培养基或缓冲液混合过但未使用完的ABW® Matrigengel 基底膜基质，不建议保留再用。

22. ABW® Matrigengel 基底膜基质中含有 DNA和/或RNA吗?

       是的。ABW® Matrigengel 基底膜基质没有经过DNA酶或RNA酶消化处理，可能会含有痕量的DNA、RNA。

23. ABW® Matrigengel 基底膜基质中有血管内皮生长因子（VEGF）和金属蛋白酶（MMPs）吗?

       在标准浓度的ABW® Matrigengel 基底膜基质中含有 5.0-7.5 ng/mL 的血管内皮生长因子（ VEGF），GFR ABW® Matrigengel 基底膜基质中VEGF含量为1.0-1.5 ng/mL。另外，可能含有老鼠肿瘤细胞来源的痕量金属蛋白酶（MMPs）。

24. ABW® Matrigengel 基底膜基质中有 LDEV吗?

      没有的。ABW® Matrigengel 基底膜基质经免疫方法及PCR方法检测，并不含有乳酸脱氢酶增高病毒（LDEV）或者乳酸脫氫脢增生病毒（LDHV） 。此外，我们还针对小鼠群体及肿瘤来源筛查了其他种类的病毒。详细信息请参见产品说明书。

25. ABW® Matrigengel 基底膜基质中有尿素吗?

       没有的。在ABW® Matrigengel 基底膜基质生产准备过程中使用过尿素，后续流程中经过透析方法已经去除了。

26. ABW® Matrigengel 基底膜基质中使用的什么缓冲液？

       低葡聚糖 DMEM (1g/L)，其中包含 50 µg/mL 庆大霉素。

27. ABW® Matrigengel 基底膜基质中含有纤维连接蛋白（Fibronectin）吗？

       是的，通过使用Western Blot检验，我们在ABW® Matrigengel 基底膜基质中发现了微量的纤维连接蛋白（Fibronectin）

28. ABW® Matrigengel 基底膜基质中含有玻璃体结合蛋白（ vitronectin）吗?

      某些EHS组织中可能含有微量的血液，因此ABW® Matrigengel 基底膜基质中可能会有痕量的玻璃体结合蛋白（Vitronectin）。

29. ABW® Matrigengel 基底膜基质 中还有什么别的物质？

       ABW® Matrigengel 基底膜基质中还可能含有浓度小于 0.02%的三氯.甲.烷，以及肿瘤细胞的产生的其他未知蛋白或分子。

30. 提取过程会引起层粘连蛋白变性吗？

       不会的，不会引起层粘连蛋白变性。

31. ABW® Matrigengel 基底膜基质可以储存在 -70℃吗？

       是的。ABW® Matrigengel 基底膜基质可以储存在-70℃。建议客户将整瓶的ABW® Matrigengel 基底膜基质进行分装，储存于聚丙烯或其他可以耐受超低温条件材质的小管中，方便保存和使用。

32. ABW® Matrigengel 基底膜基质的折射率是多少？

       20℃ 条件下，ABW® Matrigengel 基底膜基质的折射率是 1.3406 到 1.3407，相对折射率为1.0056（同等条件下，水的折射率为 1.333）。

33. ABW® Matrigengel 基底膜基质会有自发荧光吗？

      ABW® Matrigengel 基底膜基质是一种蛋白混合物，经过透析处理后溶解在 DMEM 培养基中。为防止微生物污染，培养基中添加了庆大霉素。所以ABW® Matrigengel 基底膜基质可能引发荧光的组分包括其中的蛋白质成分，维生素成分以及庆大霉素（氨基糖苷类抗生素）。如果需要使用荧光检测细胞生长状态，建议使用者建立对照实验，在所需要的波长条件下进行对比，以便排除背景荧光。

34. 使用 ABW® Matrigengel 基底膜基质培养的细胞，如果需要进行切片或者免疫组织化学及免疫荧光检验，该怎样固定呢？如何避免解聚？

        可以使用 2%浓度的多聚.甲.醛进行固定。为避免固定后出现解聚的情况，可以加入 1%浓度的戊.二.醛。戊.二.醛作为固定剂，常用于电镜观察。如果用户需要进行免疫荧光检验，加入戊.二.醛后，会出现明显的背景荧光。为了解决这一问题，我们建议用户在固定之后，使用 NaBH4 进行淬灭。NaBH4 极易气泡，进行该步骤时，必须在水平操作台上小心操作，避免晃动，尽量减少气泡的形成。另外，用户也可以尝试使用较低浓度的戊.二.醛进行固定，如 0.1%到 0.5%，浓度越低，背景荧光信号越少。